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B16系列細(xì)胞屬于小鼠黑色素瘤細(xì)胞系，是源自C57小鼠的一種皮膚癌細(xì)胞，常用于腫瘤生物學(xué)研究。
本期細(xì)胞學(xué)堂為大家整理了B16系列細(xì)胞的培養(yǎng)方法與注意事項(xiàng)，B16細(xì)胞黑色素的形成原因及解決方法，幫助您快速上手開展實(shí)驗(yàn)。
01
B16系列細(xì)胞培養(yǎng)方法
培養(yǎng)條件
RPMI-1640(PM150110)＋10%FBS(164210-50)＋1%P/S(PB180120)；
生長(zhǎng)特性
貼壁生長(zhǎng)，生長(zhǎng)迅速，能產(chǎn)生黑色素；
傳代方式
0.25%含EDTA的胰蛋白酶消化2-3min，推薦傳代比例1:3-1:4；
凍存
推薦凍存密度1-5×106cell/ml。
注意事項(xiàng)
（1）細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，培養(yǎng)密度不宜過(guò)高，需要及時(shí)傳代和換液，細(xì)胞密度過(guò)高，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差，死亡；
（2）細(xì)胞內(nèi)含黑色素，在細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生黑色素，遇到培養(yǎng)基顏色變深，消化下來(lái)的細(xì)胞離心后，沉淀為黑褐色或者是灰黑色，此為正常現(xiàn)象。
復(fù)蘇時(shí)細(xì)胞沉淀顏色:“灰黑色"（1640培養(yǎng)基）
細(xì)胞產(chǎn)黑色素導(dǎo)致培養(yǎng)基變色（1640培養(yǎng)基）
細(xì)胞產(chǎn)黑色素導(dǎo)致培養(yǎng)基變色（DMEM培養(yǎng)基）
02
黑色素形成原因
該細(xì)胞在體外培養(yǎng)有兩種培養(yǎng)條件：快速分裂增殖和分化成熟，培養(yǎng)基條件不同可改變?cè)摷?xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，使用RPMI-1640培養(yǎng)基可使其快速增殖，而使用DMEM培養(yǎng)基能誘導(dǎo)細(xì)胞分化成熟并合成黑色素。建議正常擴(kuò)增凍存請(qǐng)使用RPMI-1640培養(yǎng)基，若需要進(jìn)行分泌黑色素等后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)，可以在擴(kuò)增凍存細(xì)胞后更換為DMEM培養(yǎng)來(lái)滿足實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。
需要注意的是，B16細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基條件較為敏感，同樣是DMEM或RPMI-1640培養(yǎng)基，不同型號(hào)、不同廠家的產(chǎn)品，其具體成分的少許差異都有可能改變B16系列細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)。在實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)慎重選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)時(shí)最好是保持和購(gòu)買細(xì)胞的廠家同一型號(hào)的培養(yǎng)基，以保證細(xì)胞的性狀穩(wěn)定。
更換培養(yǎng)條件，比如由RPMI-1640更換成DMEM會(huì)導(dǎo)致黑色素大量形成，細(xì)胞培養(yǎng)基變黑，但若穩(wěn)定培養(yǎng)時(shí)未更換培養(yǎng)基，出現(xiàn)培養(yǎng)基突然變黑的情況，有可能是以下幾個(gè)原因引起的：
1
細(xì)胞死亡
如果細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)大量細(xì)胞死亡，細(xì)胞的代謝產(chǎn)物和細(xì)胞碎片可能會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基變黑。這可能是由于細(xì)胞因狀態(tài)變差、污染或其他因素引起的。
2
細(xì)胞污染
如果培養(yǎng)基中出現(xiàn)污染（細(xì)菌、真菌、支原體、黑膠蟲等），這些微生物的生長(zhǎng)和代謝產(chǎn)物可能導(dǎo)致培養(yǎng)基變黑。
03
客戶B16-F10細(xì)胞實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)分享
(以下為客戶實(shí)戰(zhàn)經(jīng)驗(yàn)分享，僅做參考)
01
為了保證B16-F10細(xì)胞的活性，通常在傳代時(shí)盡可能控制胰酶的溫度及消化時(shí)間，關(guān)注B16-F10細(xì)胞的消化狀態(tài)（顯微鏡下看到細(xì)胞明顯分離變圓，側(cè)立培養(yǎng)瓶細(xì)胞可以滑落時(shí)可終止消化）。消化過(guò)度導(dǎo)致B16-F10細(xì)胞損傷、活性下降。尤其是在進(jìn)行黑色素合成、分泌和酪氨酸酶活性等相關(guān)實(shí)驗(yàn)時(shí)，更需注意胰酶的消化時(shí)間，細(xì)胞的消化狀態(tài)。
02
使用光線對(duì)B16-F10細(xì)胞進(jìn)行輻照處理時(shí)，有兩點(diǎn)值得關(guān)注的地方：
（1）光照時(shí)須打開培養(yǎng)皿蓋，以確保光線照射在B16-F10細(xì)胞上，而非被培養(yǎng)皿蓋折射與吸收；
（2）輻照前，需要將培養(yǎng)基換成無(wú)酚紅的RPMI-1640完-全培養(yǎng)基。避免酚紅對(duì)光線的吸收作用，影響試驗(yàn)結(jié)果。
04
B16系列細(xì)胞的常見應(yīng)用
1
黑色素瘤生物學(xué)研究
B16細(xì)胞系可以用于黑色素瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究。通過(guò)模擬黑色素瘤細(xì)胞在體內(nèi)的行為，探索細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、轉(zhuǎn)移等過(guò)程。
2
腫瘤藥物篩選
B16細(xì)胞在體外培養(yǎng)中可以用于篩選和評(píng)估抗黑色素瘤藥物的療效。通過(guò)將藥物添加到培養(yǎng)基中，研究藥物對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的影響，以評(píng)估其抗腫瘤活性。
3
免疫治療研究
B16細(xì)胞可以用作免疫治療研究的模型。例如，可以將免疫刺激劑或免疫檢查點(diǎn)抑制劑添加到培養(yǎng)基中，研究它們對(duì)細(xì)胞免疫應(yīng)答和腫瘤生長(zhǎng)的影響，以評(píng)估其在黑色素瘤治療中的潛力。
4
黑色素瘤轉(zhuǎn)移研究
B16細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力是其研究的重要方面?？梢酝ㄟ^(guò)將細(xì)胞注射到小鼠的血液循環(huán)或特定的器官中，研究黑色素瘤細(xì)胞的遷移和轉(zhuǎn)移機(jī)制，以及針對(duì)轉(zhuǎn)移的治療策略。
5
細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)研究
B16細(xì)胞可以用于研究細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路在黑色素瘤發(fā)生和發(fā)展中的作用。例如，可以通過(guò)轉(zhuǎn)染或抑制特定的信號(hào)分子或途徑，研究其對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲等生物學(xué)行為的影響。
注意：
B16系列細(xì)胞雖然在黑色素瘤研究中被廣泛使用，但其在體外培養(yǎng)中仍然存在一些局限性，如與體內(nèi)環(huán)境的差異、細(xì)胞株的異質(zhì)性等。因此，在研究中需要綜合使用其他模型和方法，以更好地模擬和了解黑色素瘤的生物學(xué)特性。
●參考文獻(xiàn)●
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